氣密性檢查

檢查前準(zhǔn)備工作

? 檢查軸封情況，如果出現(xiàn)軸封破損、壓緊彈簧松動斷裂等情況，停止使用并報修，由機(jī)修或者廠家售后處理。
? 用手旋轉(zhuǎn)電機(jī)連接的軸銷，感覺能轉(zhuǎn)動但有阻力感為正常，如果過松或者過緊，請停止使用并報修，由機(jī)修或者廠家售后處理。
? 檢查各個電極護(hù)套等螺紋接口是否擰緊，如有松動，擰下接口檢查內(nèi)部O形圈是否完好，如有破損，更換新的O形圈并用手?jǐn)Q緊即可。
? 檢查接種補(bǔ)料復(fù)用接口的硅膠墊，如果是使用過的，建議更換。
此硅膠墊為一次性使用，重復(fù)使用會增加染菌風(fēng)險。
? 確定不使用的罐蓋接口可更換為專用堵頭或者用合適的硅膠管連接并扎死末端。
非六角螺母禁止使用工具擰緊，六角螺母拆卸由機(jī)修人員完成。

固定罐蓋

? 將罐蓋小心放入玻璃罐體內(nèi)，對準(zhǔn)固定螺絲口，將固定螺絲用手?jǐn)Q入，最后對角順序依次擰緊，直到所有螺絲松緊一致。
禁止使用工具擰緊，額外的力矩可能會導(dǎo)致密封墊圈過度壓緊或者壓緊程度不一致，極易導(dǎo)致消毒過程中損壞罐體。

安裝電極

? 將電極用水濕潤表面后插入豎直插入電極護(hù)套并懸緊。
可根據(jù)實(shí)際使用情況，提前進(jìn)行電極的檢查和標(biāo)定。
如果電極插入阻力很小，則可能是護(hù)套內(nèi)部O形圈失效，檢查并更換O形圈。
如果電極插入過程阻力很大，進(jìn)一步潤濕電極表面和護(hù)套內(nèi)O形圈，如果仍然阻力很大，停止操作并報修。
注意：電極和護(hù)套以及護(hù)套和罐體接口之間密封均為O形圈密封，過度擰緊電極或者護(hù)套均不能增加密封程度。過度擰緊會損壞設(shè)備，此處擰緊禁止使用工具。pH電極難以從護(hù)套中徒手?jǐn)Q出，可能是O形圈被料液黏住，用熱水浸泡一段時間嘗試徒手?jǐn)Q出，如需借助工具必須十分緩慢用力。

氣密性檢查

? 向罐體內(nèi)加水至3.5L左右。
玻璃罐嚴(yán)禁空罐加壓！? 將排氣管連接到帶有壓力表的尾氣緩沖瓶，并關(guān)閉尾氣緩沖瓶排氣和到質(zhì)譜閥門。
? 連接進(jìn)氣口，并設(shè)置進(jìn)氣流量為2L/min。
? 觀察壓力表，當(dāng)壓力升高到0.05Mpa時，用止水夾夾住進(jìn)氣管，如果有過濾器，夾住靠近罐體一側(cè)。
? 觀察壓力表指針變化，2h內(nèi)沒有明顯的下降則表示氣密性良好。如果壓力下降，可通過聲音或者用肥皂水檢查漏點(diǎn)，排除后重新按照上述步驟進(jìn)行壓力試驗(yàn)。
? 壓力試驗(yàn)結(jié)束或者需要中斷時，首先打開尾氣緩沖瓶排氣閥門，待壓力表指針到零后，繼續(xù)其他操作。
禁止在帶罐壓的情況下關(guān)閉進(jìn)氣或者拔下進(jìn)氣口，否則會導(dǎo)致罐內(nèi)液體通過空氣分布器進(jìn)入空氣過濾器。因此，建議關(guān)閉進(jìn)氣或者拔下進(jìn)氣口操作前用止水夾夾死過濾器到罐體之間的管道。
氣密性檢查完成后，如需再次打開罐蓋，首先取出pH和DO電極，并妥善放置。

電極的檢查和標(biāo)定

? 檢查pH電極玻璃電極是否有裂痕、電解液是否嚴(yán)重變色。
? 檢查DO電極膜是否完好、電解液是否充足。
DO電極膜破損往往會導(dǎo)致電解液泄露，發(fā)酵液污染內(nèi)電極，更換電極膜的同時要添加電解液，清理內(nèi)電極。

電極的活化

? 上電12小時以上，pH電極浸入飽和的KCl溶液，DO電極浸入水中。
注意：如果不進(jìn)行活化，電極標(biāo)定后在使用過程中會有較大漂移。

pH電極標(biāo)定

pH電極標(biāo)定均為兩點(diǎn)緩沖液標(biāo)定，根據(jù)所控制的pH選擇兩種不同pH的緩沖液。
? 電極標(biāo)定界面輸入兩種緩沖液的pH值。
? 待緩沖液溫度恢復(fù)至室溫。
? 將pH電極插入一種緩沖液中，待數(shù)值穩(wěn)定，按下對應(yīng)的確認(rèn)鍵。
? 用去離子水清洗電極表面并用吸水紙沾干，將電極浸入另一種緩沖液中，待數(shù)值穩(wěn)定后，按下對應(yīng)的確認(rèn)鍵。
? 再次將電極用去離子水清洗電極表面并用吸水紙沾干，浸入第一種緩沖液，觀察讀數(shù)變化情況，如果電極讀數(shù)不能在短時間內(nèi)回到緩沖液對應(yīng)值，考慮重新標(biāo)定，稍后標(biāo)定或者更換電極。
如果pH電極從一種緩沖液穩(wěn)定后浸入另一種緩沖液，讀數(shù)沒有太大變化或者變化很慢，首先檢查mV值是否有較大變化。如果mV變化跟理論值近似，則需要檢查兩點(diǎn)的pH值設(shè)置和緩沖液pH是否對應(yīng)，并嘗試重新標(biāo)定；如果mV變化很小或者很慢，則要考慮電極活化時間，或者考慮電極使用時間接近壽命。

DO電極標(biāo)定

? DO電極零點(diǎn)不需要每次標(biāo)定，如需標(biāo)定可用氮?dú)鈿馇蛱自陔姌O膜端，扎緊后標(biāo)定零點(diǎn)。
? DO電極滿度標(biāo)定根據(jù)實(shí)際試驗(yàn)情況進(jìn)行標(biāo)定，可以在種前或者常壓下標(biāo)定。
DO電極零點(diǎn)如果要求不高，可以直接將0nA標(biāo)定位零點(diǎn)。
DO電極滿度標(biāo)定需要在培養(yǎng)溫度下標(biāo)定，如果標(biāo)定溫度和培養(yǎng)溫度差異過大，會導(dǎo)致標(biāo)定值不準(zhǔn)。
DO電極滿度標(biāo)定完成后，常壓標(biāo)定應(yīng)該在60nA左右，0.05MPa標(biāo)定滿度在90nA左右，nA值過低說明電極異常，需重新檢查電極膜、電解液以及內(nèi)電極。

罐重去皮

此型號反應(yīng)器采用的是獨(dú)立的電子秤，電子秤的標(biāo)定等操作請參照電子秤說明書。
? 將罐內(nèi)液體排空。
對于空消后分裝發(fā)酵液的操作，罐內(nèi)的水無法完全排出，會有部分死體積。如果需要精確計量發(fā)酵液量，需要提前進(jìn)行排水試驗(yàn)，確定排放死區(qū)的量，并在電子秤讀數(shù)基礎(chǔ)上加上死區(qū)的量。
? 將發(fā)酵罐放置在秤盤上，連接溫控水循環(huán)、所有的電極、攪拌電機(jī)。
? 打開手動冷卻，使夾套或盤管充滿水。
? 按下電子稱面板上去皮按鈕。
在本批發(fā)酵結(jié)束前，禁止再次操作電子秤面板。

消毒

臺式玻璃反應(yīng)器采用離位消毒，消毒需要蒸汽滅菌鍋/柜。

進(jìn)料

將預(yù)先配置好的發(fā)酵液加入罐內(nèi)，如果需要消后加入發(fā)酵液，則根據(jù)試驗(yàn)要求加入自來水或者純化水，液位不低于電極下端，通常推薦初始裝液量為2.5-3L。
? 確認(rèn)已經(jīng)完成并通過氣密性檢查。
? 確認(rèn)已經(jīng)完成pH的兩點(diǎn)標(biāo)定。
? 確認(rèn)已經(jīng)完成DO的零點(diǎn)或兩點(diǎn)標(biāo)定。
? 如需加入發(fā)酵液，將培養(yǎng)基提前加水溶解或者混勻，少量物質(zhì)建議單獨(dú)溶解加入或者配成母液加入。
? 打開接種口，可以使用漏斗將配好的發(fā)酵液或者水加入罐內(nèi)，并根據(jù)需要用少量水洗滌漏斗，最后根據(jù)罐體稱重加水至工藝體積。
? 完成后旋回接種口，注意不要擰太緊，并稍微旋松一點(diǎn)補(bǔ)料蓋。

包扎

? 用錫箔紙包扎pH和DO電極的接頭。
? 用止水夾夾住空氣過濾器到罐體之間的硅膠管
? 用止水夾夾住取樣口。
? 檢查確認(rèn)罐頂沒有其他接口處于開放。
? 用8層紗布和牛皮紙包扎出氣口。

消毒

? 將空氣、溫控水循環(huán)從控制柜斷開，并保持夾套滿水。
? 將空氣、溫控水循環(huán)接頭纏繞在罐頂，但不要將管路夾死。
? 將發(fā)酵罐放入蒸汽滅菌鍋/柜中，并確認(rèn)尾氣排氣口不會浸泡在滅菌鍋/柜下表面水中，若有需要，可以將排氣冷凝管從罐蓋拔出，傾斜放置在罐蓋上。
? 按照蒸汽滅菌鍋/柜操作方法進(jìn)行消毒，通常建議有夾套罐體121攝氏度消毒2小時，單層罐體121攝氏度消毒30分鐘。
? 消毒結(jié)束后，待滅菌鍋/柜的壓力自然降到零后取出發(fā)酵罐。
注意防止?fàn)C傷。

待用

? 將發(fā)酵罐放置在罐體稱上。
? 連接空氣進(jìn)氣，打開空氣，通過質(zhì)量流量計設(shè)置控制流量2L/min。
? 打開過濾器后部止水夾，并觀察罐內(nèi)確認(rèn)空氣進(jìn)到罐體。
? 連接溫控循環(huán)水接頭，注意下進(jìn)上出，點(diǎn)開手動冷卻進(jìn)行降溫。
? 待溫度降低到接近工作溫度，改為自動控制，將尾氣包裹的紗布取下，連接到尾氣緩沖瓶。
? 全開尾氣緩沖瓶到質(zhì)譜閥門，通過尾氣緩沖瓶排氣閥門控制罐壓在工作壓力。
過早連接尾氣管路會使得大量冷凝水在尾氣緩沖瓶內(nèi)聚集。